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Técnica · Cromatografía líquida

Cromatografía líquida HPLC y UHPLC:
el caballo de batalla del laboratorio analítico

La cromatografía líquida de alta resolución es la técnica más instalada en los laboratorios de control de calidad del Perú. Sirve para casi todo lo que no se puede evaporar: principios activos, vitaminas, azúcares, conservantes, micotoxinas, aditivos y residuos.

Aquí encontrarás qué equipo necesitas, con qué norma se trabaja cada análisis, nuestros sistemas Knauer AZURA y el servicio que damos a equipos Agilent, Waters, Shimadzu y Thermo ya instalados.

Se usa sobre todo en: Farmacéutica, alimentos y bebidas, agroexportación, aguas, cosmética, universidades

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Qué resuelve la cromatografía líquida y cómo funciona

Un HPLC bombea una fase móvil (agua, buffer, acetonitrilo o metanol) a presión constante a través de una columna rellena de partículas muy finas, normalmente sílice recubierta con cadenas C18. La muestra se inyecta en esa corriente y cada compuesto avanza a una velocidad distinta según cuánto se retiene en la fase estacionaria. A la salida, un detector registra lo que va apareciendo: el resultado es un cromatograma en el que cada pico es un compuesto, identificado por su tiempo de retención y cuantificado por su área frente a una curva de calibración con estándares certificados.

La UHPLC (cromatografía líquida de ultra alta resolución) es la misma técnica llevada a partículas de menos de 2 µm y presiones de 1.000 a 1.500 bar. Las columnas más cortas y eficientes acortan una corrida de 30 minutos a 5 o 6, con picos más estrechos y menos consumo de solvente. El precio a pagar es un equipo más exigente en volumen muerto, filtración de muestra y calidad de fase móvil. Entre ambos extremos está el terreno de los 600 a 900 bar, donde hoy trabaja la mayoría de los laboratorios: equipos como el Knauer AZURA 862 bar, el Agilent 1260 Infinity II (600 bar) o el Shimadzu i-Series aceptan tanto columnas convencionales de 5 µm como columnas de núcleo sólido de 2,7 µm.

Lo que distingue un buen sistema no es el número de bar, sino cuatro cosas medibles: la exactitud y precisión del caudal (que fija la repetibilidad del tiempo de retención), el volumen de retardo del gradiente, el arrastre entre inyecciones (un buen muestreador está por debajo de 0,001 %) y el ruido y deriva del detector, que determinan el límite de cuantificación. Son los parámetros que se verifican en una calificación operacional según USP <1058> y los que conviene pedir por escrito antes de comprar.

Aplicaciones típicas de HPLC en el Perú y sus normas

Cada análisis fija el detector y la columna. Estos son los que más nos piden las plantas peruanas, con la referencia normativa que suele exigir el cliente o el auditor.

Qué equipo se necesita para HPLC

Un sistema se compone de cinco módulos. En un equipo modular como el AZURA se compran por separado y se pueden cambiar; en un equipo integrado vienen en una sola caja.

Bomba y desgasificador

Define la exactitud del caudal y, con ello, la repetibilidad del tiempo de retención. Isocrática para métodos de una sola fase móvil; binaria de alta presión para gradientes rápidos y reproducibles; cuaternaria de baja presión para desarrollar métodos mezclando hasta cuatro solventes. El desgasificador evita burbujas que hacen bailar la línea base.

Inyector automático

Elimina el error de inyección manual, permite dejar secuencias corriendo de noche y, con termostato a 4 °C, protege muestras inestables como vitaminas o derivados fluorescentes. Un muestreador de 108 viales cubre una jornada; un manipulador de líquidos con 390 posiciones, una semana.

Horno de columna

La temperatura cambia la retención y la viscosidad. Sin control termostático (por ejemplo, 5 a 85 °C con ±0,1 °C), los tiempos de retención se mueven entre la mañana y la tarde y la secuencia falla la idoneidad del sistema. Los hornos con conmutación de columnas permiten tener varios métodos listos.

Detector

UV/Vis de longitud de onda variable para lo general; arreglo de diodos (DAD) para confirmar pureza de pico y registrar espectros; fluorescencia (FLD) para trazas como micotoxinas y HAP; índice de refracción (RID) para azúcares y polímeros; ELSD para lípidos y tensoactivos sin cromóforo; espectrómetro de masas para identificar y bajar límites.

Software de datos (CDS)

Controla el equipo, integra los picos y guarda la pista de auditoría. En industria regulada debe cumplir 21 CFR parte 11: usuarios, firmas electrónicas y registros inalterables. ClarityChrom, OpenLab, Chromeleon, Empower y LabSolutions son los más usados en el Perú.

Agua, gases y consumibles

Agua ultrapura tipo I (18,2 MΩ·cm, bajo TOC) para fases móviles; nitrógeno para el ELSD o el espectrómetro de masas; columnas, precolumnas, viales, filtros de jeringa y estándares certificados. Es lo que sostiene el método mes a mes.

Nuestros equipos de HPLC y UHPLC: Knauer AZURA

Cotizamos Knauer, fabricante alemán de HPLC desde 1962. Estas son las configuraciones que más instalamos; todas se amplían por módulos.

AZURA HPLC 862 bar cuaternario con DAD — Knauer

AZURA HPLC 862 bar cuaternario con DAD

Knauer · 961

El equipo de rutina para farma y alimentos: gradiente cuaternario para desarrollar métodos y DAD de 190 a 1.000 nm para pureza de pico.

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AZURA HPLC 862 bar binario con detector UV — Knauer

AZURA HPLC 862 bar binario con detector UV

Knauer · 962

Gradiente binario de alta presión y detector UV/Vis variable. Ideal cuando el método ya está validado a una longitud de onda fija.

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AZURA HPLC 862 bar isocrático con RID — Knauer

AZURA HPLC 862 bar isocrático con RID

Knauer · 960

Para azúcares, alcoholes, ácidos orgánicos y polímeros: detector de índice de refracción con óptica termostatizada.

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AZURA UHPLC 1240 bar binario con DAD — Knauer

AZURA UHPLC 1240 bar binario con DAD

Knauer · 982

Bomba P 8.1L de 1240 bar para columnas sub-2 µm, métodos rápidos y acoplamiento a espectrómetro de masas.

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AZURA HTQC para control de calidad de alto rendimiento — Knauer

AZURA HTQC para control de calidad de alto rendimiento

Knauer · 982

Manipulador de líquidos refrigerado, conmutación de columnas y preparación anticipada de la siguiente inyección para laboratorios con cola de muestras.

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AZURA Educational: HPLC para enseñanza — Knauer

AZURA Educational: HPLC para enseñanza

Knauer · 950

Sistema de 400 bar con inyección manual y UV de 190 a 500 nm para universidades e institutos; usa los mismos módulos que el equipo profesional.

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Marcas de HPLC que podemos cotizar en el Perú

Knauer

Sistemas HPLC 862 bar, UHPLC 1240 bar, preparativos, BIO, SMB y GPC/SEC; detectores UVD, DAD, RID, FLD y ELSD; osmómetro K-7400S. Fabricados en Berlín.

Cotízala con Solinex

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Restek

Columnas LC de núcleo sólido Raptor y totalmente porosas Force y Roc, precolumnas, viales, tapas y septas, filtros de jeringa. Compatibles con cualquier marca de HPLC.

Cotízala con Solinex

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CPAChem

Estándares certificados según ISO 17034 para curvas de calibración y control de calidad interno: orgánicos, aniones, cationes y buffers.

Cotízala con Solinex

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Biotage

Extracción en fase sólida (ISOLUTE, EVOLUTE) y cromatografía flash (Isolera, Selekt) para limpiar y concentrar la muestra antes de inyectarla.

Cotízala con Solinex

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Otras marcas de HPLC del mercado peruano

Son las que más vas a encontrar instaladas en laboratorios del Perú. No las representamos, pero sí les damos servicio, calibración, consumibles compatibles y, cuando toca renovar, un equivalente Knauer.

Agilent

Series 1100, 1200, 1260 y 1290 Infinity II, con OpenLab CDS. La base instalada más grande del Perú.

También la atendemos

Repuestos y equivalentes →

Waters

Alliance e2695 e iS, ACQUITY UPLC, Arc HPLC y espectrómetros Xevo, con Empower.

También la atendemos

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Shimadzu

Prominence LC-20, Nexera LC-40 e i-Series LC-2050/2060, con LabSolutions.

También la atendemos

Repuestos y equivalentes →

Thermo Fisher Scientific

Vanquish Core, Flex y Horizon, UltiMate 3000 y Dionex para cromatografía iónica, con Chromeleon.

También la atendemos

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Metrohm

Cromatografía iónica para aniones y cationes en aguas, con detección de conductividad suprimida.

También la atendemos

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JASCO

HPLC analítico y preparativo, cromatografía de fluidos supercríticos y detectores de dicroísmo circular.

También la atendemos

Buchi

Cromatografía flash y preparativa Pure para purificación en síntesis y productos naturales.

También la atendemos

PerkinElmer

HPLC Flexar y LC 300, con Chromera y detectores UV y fluorescencia.

También la atendemos

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Cómo elegir entre HPLC, UHPLC y las configuraciones más comunes

Situación del laboratorioRecomendaciónPor qué
Métodos de farmacopea ya validados, 10 a 40 muestras al díaHPLC 862 bar isocrático o binario con UV o DADReproduce las monografías sin revalidar; el margen de presión permite usar columnas de núcleo sólido y acortar corridas cuando convenga.
Desarrollo de métodos, matrices variadas (alimentos, cosmética)HPLC cuaternario con DAD y horno con conmutación de columnasCuatro solventes para explorar selectividad, espectros para identificar picos y varias columnas listas en el mismo equipo.
Micotoxinas, HAP, aminas biógenasHPLC con detector de fluorescenciaSensibilidad de trazas (ng/g) y selectividad frente a la matriz; exigido por AOAC 991.31 y métodos SANIPES.
Azúcares, alcoholes, glicoles, polímerosHPLC isocrático con RIDDetecta compuestos sin cromóforo; el RID no admite gradientes, así que el sistema puede ser isocrático y más económico.
Más de 100 muestras al día o acoplamiento a MSUHPLC 1240 bar con DAD, o HTQC con manipulador de líquidosCorridas de pocos minutos, menor consumo de solvente y compatibilidad con columnas sub-2 µm; la automatización reduce el tiempo muerto entre inyecciones.
Universidad o instituto que enseña cromatografíaHPLC educativo de 400 bar con inyección manualBajo costo de entrada, robusto y ampliable después con inyector automático y otros detectores.

Si vienes de un equipo de otra marca, transferimos el método y documentamos la comparación de tiempos de retención, resolución y precisión.

Consumibles y repuestos para HPLC

Lo que hay que reponer para sostener el método, compatible con Knauer, Agilent, Waters, Shimadzu y Thermo.

Preguntas frecuentes

¿Cuánto dura una columna de HPLC?

No se mide en meses sino en número de inyecciones y, sobre todo, en qué tan limpia entra la muestra. Con filtración a 0,45 µm, una precolumna y fases móviles bien preparadas, una columna analítica supera con facilidad las mil inyecciones. Sin filtrar la muestra o con buffers que precipitan en acetonitrilo, puede arruinarse en semanas.

¿Vale la pena pasar de HPLC a UHPLC?

Si el laboratorio tiene cola de muestras, sí: las corridas bajan de 20–30 minutos a 3–6 y el consumo de solvente cae en la misma proporción. Si el volumen es moderado y los métodos están validados en HPLC, migrar exige una transferencia documentada, aunque la revisión de USP <621> de 2022 facilita bastante los ajustes permitidos. Un equipo de 862 bar es un punto intermedio razonable.

¿Qué detector necesito para micotoxinas?

Fluorescencia. Las aflatoxinas y la ocratoxina A fluorescen de forma natural y el FLD las detecta en niveles de décimas de ng/g después de una limpieza en columna de inmunoafinidad, como exige AOAC 991.31. El UV no llega a esos límites en matrices complejas.

¿Con qué frecuencia hay que calificar y calibrar el equipo?

Lo habitual en industria regulada es una calificación operacional y de desempeño (OQ/PQ) anual, más verificación cuando se cambia un módulo o se traslada el equipo. Solinex realiza IQ/OQ/PQ según USP <1058> y calibración con trazabilidad de patrones cumpliendo ISO/IEC 17025.

¿Atienden equipos Agilent, Waters o Shimadzu aunque no los vendan?

Sí. Damos mantenimiento preventivo, calibración, columnas y viales compatibles Restek y estándares CPAChem para cualquier marca de HPLC. Y cuando toca renovar, proponemos el equivalente Knauer que reproduce tu método, con la ventaja de poder seguir usando OpenLab o Chromeleon si ya los tienes.

¿Qué agua y qué solventes necesito?

Agua ultrapura tipo I con resistividad de 18,2 MΩ·cm y carbono orgánico total bajo (idealmente menos de 5 ppb), sobre todo para gradientes con detección UV a longitudes de onda cortas, y solventes grado HPLC o LC-MS. Un sistema de purificación en el laboratorio suele salir más económico que comprar agua embotellada al cabo de un año.

¿Necesitas un HPLC, columnas o servicio en el Perú?

Cuéntanos qué necesitas medir, en qué matriz y bajo qué norma. Te respondemos con la configuración adecuada, el consumible que corresponde y el plan de calificación y calibración. Cotización en menos de 24 horas hábiles; atendemos Lima, Arequipa, Trujillo, Piura, Cusco y zonas mineras del interior.

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