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UV-Vis · Colorimetría · DQO · USP 857 · Standard Methods

Espectrofotometría UV-Vis:
la técnica que más resultados firma en un laboratorio

Un espectrofotómetro UV-Visible mide cuánta luz absorbe una solución a una longitud de onda concreta y convierte esa absorbancia en concentración. Con él se reportan la DQO de un efluente, el nitrito de una salchicha, el cianuro de una solución de lixiviación y la disolución de una tableta.

Es barato de operar, rápido y está en casi todas las normas. Lo difícil no es medir: es elegir bien entre fotómetro, espectrofotómetro visible y UV-Vis de doble haz, y mantenerlo calificado.

Se usa sobre todo en: Aguas y efluentes, alimentos y bebidas, farmacéutica, clínica, minería y metalurgia, universidades

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Qué resuelve la espectrofotometría UV-Vis

Las moléculas con dobles enlaces conjugados, anillos aromáticos o iones metálicos absorben luz ultravioleta (190 a 400 nm) o visible (400 a 800 nm). Según la ley de Beer-Lambert, la absorbancia es proporcional a la concentración y al paso óptico de la cubeta, así que basta una curva de calibración con patrones para cuantificar. Cuando el analito no absorbe por sí mismo —fosfato, nitrito, cloro, cianuro—, un reactivo lo convierte en un complejo coloreado: eso es la colorimetría, y es la base de buena parte de los métodos de análisis de agua y alimentos.

En la práctica hay tres familias de equipos. El fotómetro trabaja con filtros o LEDs a unas pocas longitudes de onda fijas y con métodos precargados: ideal para planta y campo. El espectrofotómetro visible barre el rango de 340 a 900 nm con una red de difracción y admite métodos propios. El espectrofotómetro UV-Vis suma una lámpara de deuterio para bajar hasta 190 nm, lo que abre la puerta a nitratos por UV, ácidos nucleicos, principios activos y ensayos de farmacopea.

El resultado depende tanto del equipo como de lo que lo rodea: cubetas limpias y del material correcto, reactivos vigentes, blancos bien preparados y un plan de verificación con patrones de longitud de onda y de absorbancia. Un espectrofotómetro nunca calificado puede reportar con seguridad números que están corridos varios nanómetros.

Aplicaciones típicas de UV-Vis en el Perú

Qué espectrofotómetro se necesita

Seis variables separan un equipo que resuelve tu método de uno que te obliga a rehacerlo.

Rango: visible o UV-Vis

Si todos tus métodos son colorimétricos (DQO, fosfato, cloro, hierro), un equipo visible desde 340 nm alcanza. Si necesitas nitrato por UV a 220 nm, ácidos nucleicos a 260 nm o ensayos de farmacopea, hace falta lámpara de deuterio y rango desde 190 nm.

Haz simple, de referencia o doble haz

El haz simple mide blanco y muestra en momentos distintos: suficiente para rutina. El haz de referencia corrige en tiempo real la deriva de la lámpara. El doble haz divide la luz entre blanco y muestra a la vez y da la mejor estabilidad para barridos largos, cinéticas y trabajo regulado.

Ancho de banda espectral

Con 5 u 8 nm se hacen bien los métodos colorimétricos de agua. Las farmacopeas piden que el ancho de banda sea pequeño frente al ancho del pico: 2 nm es lo habitual en farma, y 1 nm o menos para picos finos o para la prueba de resolución con tolueno en hexano.

Cubetas

Vidrio óptico o plástico para el visible (desde unos 340 nm); cuarzo o sílice fundida para el UV. Paso óptico de 10 mm estándar, de 50 mm para concentraciones muy bajas, y viales redondos de 16 mm para reactivos predosificados y DQO.

Celdas de flujo y accesorios

Celdas de flujo con bomba sipper para series largas, carruseles multicubeta, portacubetas termostatizados para cinéticas enzimáticas, sondas de fibra óptica para disolución y accesorios de microvolumen para ADN y proteínas.

Métodos, software y trazabilidad

Métodos precargados con código de barras en los viales ahorran errores en planta. En farma importa el software con usuarios, firmas electrónicas y registro de auditoría (21 CFR Parte 11) y las pruebas automáticas de desempeño con patrones certificados.

Espectrofotómetros y fotómetros que podemos cotizar

Equipos de nuestro catálogo, desde el fotómetro de planta hasta el UV-Vis de doble haz, con reactivos, cubetas y patrones de verificación.

Lovibond XD 7500 UV-Vis — Lovibond

Lovibond XD 7500 UV-Vis

Lovibond · XD 7500 | 535000

UV-Vis de haz de referencia pensado para agua: más de 160 métodos precargados, reconocimiento de cubetas y de viales con código de barras, y apoyo a buenas prácticas de laboratorio.

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Lovibond XD 7000 visible — Lovibond

Lovibond XD 7000 visible

Lovibond · XD 7000 | 535000

La versión visible del XD 7500 para laboratorios que solo corren métodos colorimétricos: DQO, nutrientes, metales y cloro.

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Lovibond MD 600 / MD 610 — Lovibond

Lovibond MD 600 / MD 610

Lovibond · MD 600 | 214020

Fotómetros multiparámetro de laboratorio y de campo con LEDs y filtros, para quien corre siempre los mismos parámetros de agua y no necesita barrido.

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Hanna iris HI801 — Hanna Instruments

Hanna iris HI801

Hanna Instruments · HI801-01

Espectrofotómetro visible compacto de 340 a 900 nm, con métodos Hanna precargados y posibilidad de crear curvas propias.

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Hanna iris HI802 con código de barras — Hanna Instruments

Hanna iris HI802 con código de barras

Hanna Instruments · HI802-01

El iris con lector de código de barras que identifica el método desde el vial de reactivo: menos errores de digitación en planta.

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Mettler Toledo UV/VIS Excellence — Mettler Toledo

Mettler Toledo UV/VIS Excellence

Mettler Toledo

UV-Vis de arreglo de diodos con espectro completo en un segundo, pruebas automáticas USP y Ph. Eur. con CertiRef y opción de microvolumen.

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Velab VE-8000A doble haz — Velab

Velab VE-8000A doble haz

Velab · VE-8000A

Doble haz de 190 a 1.100 nm con ancho de banda de 1 nm: la opción para farma, investigación y barridos exigentes.

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Velab VE-6000T — Velab

Velab VE-6000T

Velab · VE-6000T

UV-Vis de 190 a 1.100 nm con pantalla táctil y ancho de banda de 2 nm, para control de calidad general y docencia.

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Four E's microvolumen UV-Vis — Four E's Scientific

Four E's microvolumen UV-Vis

Four E's Scientific

Cuantificación de ADN, ARN y proteínas con medio microlitro de muestra, sin cubetas.

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Marcas que podemos cotizar

Otras marcas de espectrofotómetros en el mercado

Las que más vas a encontrar en laboratorios peruanos. No las representamos, pero sí les damos servicio, verificación con patrones y cubetas compatibles. También trabajamos PG Instruments (T60, T80, T90) bajo pedido.

Shimadzu

UV-1900i de doble haz, muy instalado en farma y universidades; UV-2600i y UV-3600i para sólidos y reflectancia.

También la atendemos

Thermo Scientific

GENESYS de haz simple y dividido para rutina y docencia; Evolution de doble haz para trabajo regulado e investigación.

También la atendemos

Agilent

Cary 60 con lámpara de xenón pulsada y fibra óptica; Cary 3500 y Cary 7000 para investigación y alta exigencia.

También la atendemos

PerkinElmer

Serie LAMBDA de doble haz, desde equipos de rutina hasta modelos con esfera integradora para sólidos y películas.

También la atendemos

Hach

DR3900 visible y DR6000 UV-Vis con viales de reactivo codificados, muy presentes en plantas de tratamiento y mineras.

También la atendemos

PG Instruments

T60 de haz simple, T80 de haz dividido y T90 de doble haz, fabricados en el Reino Unido. Los integramos bajo pedido.

Bajo pedido

Qué equipo para cada análisis

AnálisisRango y ancho de bandaCubetaEquipo sugerido
DQO, fosfato, cloro y metales en aguaVisible, 5–10 nmVial redondo 16 mmLovibond XD 7000, Hanna iris, fotómetro MD 600
Nitrato por UV, carbono orgánico por absorbancia a 254 nmUV-Vis, 2–5 nmCuarzo 10–50 mmLovibond XD 7500
Nitritos y fósforo en alimentosVisible, 2–5 nmVidrio 10 mmHanna iris, Velab VE-6000T
Valoración y disolución en farma (USP <857>)UV-Vis, ≤ 2 nmCuarzo 10 mm o celda de flujoMettler Toledo UV/VIS, Velab VE-8000A
Cinéticas enzimáticas y clínicaUV-Vis 340 nm, termostatizadoCuarzo o plástico UVVelab VE-8000A con portacubetas termostatizado
Cianuro y cobre en soluciones minerasVisible, 5 nmVidrio 10 mm o vialLovibond XD 7000, Hanna iris
ADN, ARN y proteínasUV 230–280 nmMicrovolumen sin cubetaFour E's microvolumen

Si tu método viene de una norma, revisa el ancho de banda y el paso óptico que exige antes de elegir el equipo: es el error de compra más común.

Consumibles, reactivos y patrones para UV-Vis

Preguntas frecuentes

¿Fotómetro o espectrofotómetro?

Si siempre mides los mismos parámetros de agua con kits del fabricante, un fotómetro multiparámetro es más barato, más robusto y cabe en una maleta de campo. Si necesitas crear tus propios métodos, hacer barridos espectrales, trabajar con métodos de norma que piden una longitud de onda concreta o medir en UV, necesitas un espectrofotómetro.

¿Puedo usar cubetas de plástico o vidrio en el UV?

No por debajo de unos 340 nm: el vidrio óptico y el poliestireno absorben el ultravioleta y el resultado sale falso. Para trabajo en UV hacen falta cubetas de cuarzo o sílice fundida, o cubetas de plástico especiales para UV que llegan hasta unos 220 nm. Para métodos colorimétricos en el visible, el vidrio y el plástico funcionan bien.

¿Qué pide USP 857 para calificar un espectrofotómetro?

Verificar la exactitud y repetibilidad de la longitud de onda con holmio o líneas de emisión, la exactitud y linealidad fotométrica con dicromato de potasio o filtros certificados, la luz parásita con soluciones de corte como cloruro de potasio y la resolución con tolueno en hexano cuando el método lo requiere. Todo con materiales de referencia trazables y a intervalos definidos. Nuestro servicio de calificación IQ/OQ/PQ lo documenta.

¿Cada cuánto se verifica el equipo?

En farma y laboratorios bajo ISO/IEC 17025 es habitual una calificación de desempeño completa al año y una verificación rápida de longitud de onda y absorbancia mensual o antes de cada serie crítica. En una planta de tratamiento de agua, una verificación trimestral con patrones de concentración conocida suele ser suficiente. Siempre se recalifica después de cambiar una lámpara o mover el equipo.

¿Sirven los reactivos de otra marca en mi espectrofotómetro?

En un espectrofotómetro con métodos abiertos, sí: puedes construir la curva de calibración con cualquier reactivo que cumpla el método. Los métodos precargados de cada fabricante, en cambio, están ajustados a sus propios reactivos y viales, y cambiar de marca obliga a verificar o rehacer la curva. Te ayudamos con esa verificación.

¿Cómo se mide la DQO con un espectrofotómetro?

La muestra se digiere dos horas a 150 °C en un vial cerrado con dicromato de potasio y ácido sulfúrico en un termorreactor. Luego se deja enfriar y se lee el vial directamente en el espectrofotómetro, que convierte la absorbancia en mg/L de O2. Es el método 5220 D de Standard Methods, más rápido y con menos residuos que el reflujo abierto por titulación.

¿Necesitas un espectrofotómetro UV-Vis?

Cuéntanos qué parámetros mides, en qué matriz y bajo qué norma, y te proponemos el equipo Lovibond, Hanna, Mettler Toledo o Velab adecuado, con cubetas, reactivos, patrones y calibración con trazabilidad de patrones cumpliendo ISO/IEC 17025. Cotización en menos de 24 horas hábiles.

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